DIO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420002

Übersicht

Mouse **Dio1** kodiert die Iodthyronin-Deiodinase 1 (DIO1), ein Selenoenzym, das die Deiodierung von Schilddrüsenhormonen am äußeren und inneren Ring katalysiert und so zur peripheren Umwandlung von Thyroxin (T4) in das bioaktive Trijodthyronin (T3) sowie zum Hormonabbau beiträgt. Die DIO1-Aktivität unterstützt die endokrine und metabolische Homöostase, indem sie die Verfügbarkeit von Schilddrüsenhormonen innerhalb der Zelle und im Kreislauf mitbestimmt und dadurch Transkriptionsprogramme beeinflusst, die von Schilddrüsenhormonrezeptoren gesteuert werden. Dio1 wird insbesondere im Zusammenhang mit dem hepatischen und renalen Schilddrüsenhormonstoffwechsel, der Selenbiologie und der redoxabhängigen Enzymfunktion untersucht. Eine veränderte Expression oder Aktivität von Deiodinasen wurde mit einer Fehlregulation der Schilddrüsenhormonsignalgebung in metabolischen und entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien Dio1-abhängiger Signalwege in Mausmodellen motiviert.

Das DIO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dio1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dio1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dio1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DIO1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dio1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DIO1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dio1-Exone abzielen, die für die DIO1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dio1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DIO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DIO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dio1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DIO1 HDR-Plasmid (m) und DIO1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dio1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dio1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.