Plasmide CRISPR/Cas9 KO DGK-ι (h): sc-406306

Présentation

DGKI code la diacylglycérol kinase iota (DGK-ι), une enzyme qui phosphoryle le diacylglycérol (DAG) pour produire de l’acide phosphatidique, modulant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation lipidique par seconds messagers. En limitant la disponibilité du DAG, DGK-ι module des effecteurs en aval sensibles au DAG tels que la protéine kinase C et RasGRP, influençant des voies qui régissent le trafic membranaire, la dynamique du cytosquelette et des programmes transcriptionnels dépendants des stimuli. L’activité de DGK-ι est associée à la régulation de réseaux de signalisation cellulaire qui coordonnent la prolifération, la différenciation et la migration dans de multiples types cellulaires. Un déséquilibre entre DAG et acide phosphatidique, ainsi que la signalisation de la famille DGK, ont été étudiés dans des contextes incluant la biologie du cancer, la signalisation immunitaire et des processus neurologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DGK-ι (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DGKI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DGKI, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DGKI à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DGK-ι.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DGKI pour l'étude de la signalisation de DGK-ι, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DGKI essentiels à la fonction de DGK-ι
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DGKI pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DGK-ι plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DGK-ι plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DGKI. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DGK-ι plasmide HDR (h) et le DGK-ι (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DGKI pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DGKI définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.