DGK-ι Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406306

Visão geral

DGKI codifica a diacilglicerol quinase iota (DGK-ι), uma enzima que fosforila o diacilglicerol (DAG) para gerar ácido fosfatídico, moldando assim a amplitude e a duração da sinalização lipídica por segundos mensageiros. Ao limitar a disponibilidade de DAG, a DGK-ι modula efetores a jusante responsivos ao DAG, como a proteína quinase C e a RasGRP, influenciando vias que governam o tráfego de membranas, a dinâmica do citoesqueleto e programas transcricionais dependentes de estímulos. A atividade da DGK-ι está ligada à regulação de redes de sinalização celular que coordenam proliferação, diferenciação e migração em múltiplos tipos celulares. O desequilíbrio entre DAG/ácido fosfatídico e a sinalização da família DGK têm sido investigados em contextos que incluem biologia do câncer, sinalização imune e processos neurológicos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DGK-ι (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DGKI em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DGKI, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DGKI na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DGK-ι.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DGKI para a investigação da sinalização de DGK-ι, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DGKI críticos para a função DGK-ι
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DGKI para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DGK-ι Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DGK-ι Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DGKI. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DGK-ι Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DGK-ι (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DGKI para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DGKI definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.