DAP-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420151

Panoramica

Il gene murino Eif4g2 codifica DAP-5 (nota anche come eIF4G2), una piattaforma non canonica di inizio della traduzione che supporta la traduzione cap-indipendente degli mRNA, in particolare in condizioni di stress quando la traduzione cap-dipendente è attenuata. DAP-5 interagisce con componenti del macchinario di inizio e contribuisce alla traduzione mediata da IRES di specifici trascritti, modellando l’output del proteoma durante l’apoptosi, lo stress del reticolo endoplasmatico e la deprivazione di nutrienti. Attraverso il suo ruolo nel controllo traduzionale, DAP-5 influenza le decisioni di sopravvivenza cellulare, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di differenziamento. La disregolazione delle reti di traduzione collegate a EIF4G2/DAP-5 è stata associata a contesti rilevanti per la trasformazione oncogena, la neurobiologia e fenotipi di adattamento allo stress, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DAP-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif4g2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif4g2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif4g2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DAP-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif4g2 per lo studio della segnalazione di DAP-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eif4g2 critici per la funzione di DAP-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif4g2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DAP-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DAP-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif4g2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DAP-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DAP-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif4g2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif4g2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.