Plasmide CRISPR/Cas9 KO DAGLα (h): sc-402826

Présentation

DAGLA code la lipase du diacylglycérol alpha (DAGLα), une hydrolase à sérine associée à la membrane qui catalyse l’hydrolyse du diacylglycérol pour produire le 2‑arachidonoylglycérol (2‑AG), un médiateur lipidique endocannabinoïde majeur. En contrôlant la production de 2‑AG, DAGLα influence la signalisation synaptique rétrograde, l’activation du récepteur CB1 et la modulation, dépendante de l’activité, de la libération des neurotransmetteurs, reliant ainsi le métabolisme lipidique à l’excitabilité et à la plasticité neuronales. L’activité de DAGLα s’articule avec la voie phospholipase C–diacylglycérol et, plus largement, avec des réseaux lipidiques liés à l’acide arachidonique qui façonnent l’inflammation et les réponses au stress cellulaire. Une altération du tonus endocannabinoïde dépendant de DAGLA a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et est étudiée dans des contextes tels que l’épilepsie, le traitement de la douleur et la dysrégulation métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DAGLα (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DAGLA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DAGLA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DAGLA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DAGLα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DAGLA pour l'étude de la signalisation de DAGLα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DAGLA essentiels à la fonction de DAGLα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DAGLA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DAGLα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DAGLα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DAGLA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DAGLα plasmide HDR (h) et le DAGLα (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DAGLA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DAGLA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.