CSN8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430844

Panoramica

Cops8 codifica CSN8, una subunità centrale del signalosoma COP9 che regola le ligasi E3 ubiquitina cullin-RING controllando lo stato di neddilazione delle culline e, di conseguenza, influenzando il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso questa attività, CSN8 contribuisce alla proteostasi, alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e alla segnalazione adattativa allo stress, modulando la stabilità di proteine regolatorie chiave. L’alterazione della funzione del signalosoma COP9 è stata associata a cambiamenti nella segnalazione infiammatoria, a uno sviluppo e a un’omeostasi tissutale compromessi e a un’apoptosi deregolata, rendendo Cops8 rilevante per studi meccanicistici su vie che collegano la regolazione dell’ubiquitina alla fitness cellulare. Nei modelli murini, la perturbazione dei componenti CSN è spesso associata a difetti nel controllo della crescita e nella funzione d’organo, a supporto del suo impiego per indagare fenotipi cellulari rilevanti per la malattia senza implicare esiti terapeutici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CSN8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cops8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cops8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cops8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CSN8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cops8 per lo studio della segnalazione di CSN8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cops8 critici per la funzione di CSN8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cops8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CSN8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CSN8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cops8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CSN8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CSN8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cops8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cops8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.