Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CRTAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405828
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CRTAP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CRTAP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CRTAP Anticuerpo (E-1): sc-393136
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CRTAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405828 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CRTAP (proteína asociada al cartílago) codifica un componente residente del retículo endoplásmico del complejo de 3-hidroxilación de prolina, que también incluye P3H1/LEPRE1 y ciclofilina B (PPIB). Este complejo coordina la modificación posraduccional, el plegamiento y el control de calidad de los colágenos fibrilares, lo que favorece el ensamblaje de la matriz extracelular y la integridad del tejido conectivo. La función de CRTAP vincula la biosíntesis de colágeno con las vías de homeostasis proteica del RE, incluido el plegamiento asistido por chaperonas y la vigilancia de la proteostasis. La pérdida de actividad de CRTAP se asocia con osteogénesis imperfecta recesiva y displasias esqueléticas relacionadas, caracterizadas por una maduración defectuosa del colágeno y una organización anómala de la matriz.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRTAP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CRTAP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CRTAP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CRTAP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRTAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CRTAP para la investigación de la señalización de CRTAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CRTAP críticos para la función de CRTAP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CRTAP para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CRTAP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CRTAP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CRTAP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRTAP (h) y el plásmido HDR CRTAP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CRTAP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CRTAP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.