creatine kinase-M Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-401132-KO-2

Panoramica

CKM codifica la creatina chinasi M (CK-M), una fosfotransferasi citosolica che catalizza il trasferimento reversibile di un gruppo fosfato dalla fosfocreatina all’ADP per rigenerare ATP, contribuendo così a tamponare la carica energetica cellulare quando la richiesta energetica fluttua. Fortemente arricchita nel muscolo scheletrico e cardiaco, CK-M sostiene l’omeostasi dell’ATP in coordinamento con la glicolisi, la fosforilazione ossidativa e il trasporto di energia mediato dal sistema navetta della fosfocreatina nelle fibre muscolari. Alterazioni dell’attività di CKM influenzano la contrattilità muscolare e le risposte allo stress metabolico e vengono frequentemente valutate in studi su miopatie, lesioni muscolari e rimodellamento cardiometabolico. CKM funge anche da nodo meccanicistico per indagare l’adattamento energetico, la funzione mitocondriale e la segnalazione legata al redox in modelli di muscolo striato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO creatine kinase-M (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CKM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CKM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CKM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina creatine kinase-M.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CKM per lo studio della segnalazione di creatine kinase-M, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CKM critici per la funzione di creatine kinase-M
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CKM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CKM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal creatine kinase-M Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR creatine kinase-M (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CKM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CKM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.