copine 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406621

Übersicht

CPNE1 kodiert Copine 1, ein calciumabhängiges phospholipidbindendes Protein mit C2-Domänen und einer A-Domäne, die als Reaktion auf Ca²⁺-Signale die Rekrutierung an Membranen sowie Protein-Protein-Interaktionen unterstützt. Copine 1 wird damit in Verbindung gebracht, Membrantransport, Zytoskelett-Umbau und Signaltransduktion zu koordinieren, indem es Calciumflüsse mit räumlich begrenzten Interaktionen an der Plasmamembran und in endomembranären Kompartimenten koppelt. Beschriebene funktionelle Zusammenhänge umfassen die Modulation rezeptorgekoppelter Signalwege und zellulärer Stressantworten, mit nachgeschalteten Effekten auf Programme der Proliferation, Migration und Differenzierung. Eine fehlregulierte CPNE1-Expression oder -Aktivität wurde mit Tumorbiologie und weiteren Erkrankungen assoziiert, bei denen veränderte Calciumsignale und Membrandynamik zu pathogenen Phänotypen beitragen, wodurch es für mechanistische Studien in Krankheitsmodellen relevant ist.

Das copine 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CPNE1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CPNE1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CPNE1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die copine 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CPNE1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der copine 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CPNE1-Exone abzielen, die für die copine 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CPNE1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom copine 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom copine 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CPNE1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das copine 1 HDR-Plasmid (h) und copine 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CPNE1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CPNE1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.