COPG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404407

Descripción general

COPG1 codifica la subunidad gamma del complejo de proteínas del coatómero I (COPI), un complejo de recubrimiento citosólico que media la gemación de vesículas y la selección de carga en el transporte retrógrado desde el aparato de Golgi hacia el retículo endoplásmico y dentro de las cisternas del Golgi. COPG participa en el ensamblaje del recubrimiento junto con otras subunidades de COPI para regular el tráfico de membranas, la organización del Golgi y la recuperación de proteínas residentes del RE mediante señales de clasificación, apoyando así la maduración de proteínas y la homeostasis de la vía secretora. La alteración del tráfico dependiente de COPI puede perturbar las respuestas al estrés del RE, la glicosilación y la proteostasis, lo que vincula la función de COPG1 con vías relevantes para el crecimiento celular, la diferenciación y la adaptación al estrés. Los programas de secreción y tráfico alterados son aprovechados con frecuencia por estados patológicos proliferativos y relacionados con el sistema inmune, lo que convierte a COPG1 en un nodo útil para estudios mecanísticos del transporte de membranas y la dinámica de los orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COPG (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COPG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COPG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COPG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COPG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COPG1 para la investigación de la señalización de COPG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COPG1 críticos para la función de COPG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COPG1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COPG CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COPG CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COPG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COPG (h) y el plásmido HDR COPG (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COPG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COPG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.