CLIP-170 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425158

Übersicht

Clip1 kodiert CLIP-170, ein Mikrotubuli-Plusend-Tracking-Protein, das dynamische Mikrotubuli-Spitzen mit kortikalen Strukturen und Organellen verbindet, um den intrazellulären Transport und die Zellarchitektur zu koordinieren. CLIP-170 ist an der Regulation der Mikrotubuli-Polymerisation, der Anheftung von Kinetochoren an Mikrotubuli während der Mitose sowie am Transport vesikulärer und proteinhaltiger Komplexe beteiligt – unter anderem über Interaktionen mit Dynein/Dynactin und weiteren +TIP-Netzwerken. Über diese Funktionen trägt Clip1 zu Prozessen wie Zellpolarisation, Migration und Spindelorganisation bei, die in proliferativen und neuroentwicklungsbezogenen Kontexten häufig gestört sind. Veränderungen der Mikrotubuli-Dynamik und der Genauigkeit der Chromosomensegregation, die mit CLIP-170-abhängigen Signalwegen einhergehen, sind relevant für die Untersuchung von Mechanismen, die mit genomischer Instabilität und zytoskelettaler Dysfunktion in Krankheitsmodellen verknüpft sind.

Das CLIP-170 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clip1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clip1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clip1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLIP-170-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clip1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLIP-170-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clip1-Exone abzielen, die für die CLIP-170-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clip1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLIP-170 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CLIP-170 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clip1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLIP-170 HDR-Plasmid (m) und CLIP-170 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clip1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clip1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.