Centrin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400867

概要

CETN2は、保存性の高いEFハンド型カルシウム結合タンパク質であるセントリン2をコードしており、セントロソームおよび基底小体に局在して、中心小体の複製、セントロソームの完全性維持、ならびに細胞分裂時の紡錘体形成・配置に寄与します。セントリン2は一次繊毛の形成と機能にも関与し、CETN2の活性を、細胞周期制御や繊毛形成（ciliogenesis）などの微小管依存的プロセスと結び付けています。セントロソーム恒常性および繊毛シグナル伝達ネットワークにおける役割を通じて、セントリン2のダイナミクスの変化は、がんや繊毛病関連の生物学でしばしば破綻するゲノム安定性や細胞分化プログラムに影響を及ぼし得ます。そのためCETN2は、ヒト細胞においてセントロソーム関連経路、有糸分裂の忠実性、ならびに繊毛依存的なシグナル伝達の出力を解析するための分子ツールとして広く利用されています。

Centrin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCETN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CETN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CETN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Centrin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Centrin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CETN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Centrin-2の機能に不可欠なCETN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CETN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Centrin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCentrin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CETN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Centrin-2 HDRプラスミド（h）および Centrin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCETN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCETN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。