CD28 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419541

Panoramica

Cd28 codifica CD28, un recettore costimolatorio chiave sulle cellule T che potenzia la segnalazione del TCR per sostenere la piena attivazione, la produzione di IL-2, la proliferazione e la sopravvivenza. Il legame di CD28 con CD80/CD86 sulle cellule presentanti l’antigene attiva i programmi trascrizionali PI3K–AKT–mTOR e NF-κB/AP-1, orientando la differenziazione effettrice e la riprogrammazione metabolica. Stabilendo le soglie di attivazione e promuovendo l’omeostasi delle cellule T regolatorie, CD28 influenza la tolleranza periferica, l’infiammazione cronica e i fenotipi di disregolazione immunitaria osservati in modelli murini di autoimmunità e infezione. Un’alterazione della segnalazione di CD28 è rilevante anche per l’elusione immunitaria tumorale e per studi di immunopatologia che indagano le reti di checkpoint e costimolazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD28 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd28 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd28 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd28 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD28.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd28 per lo studio della segnalazione di CD28, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd28 critici per la funzione di CD28
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd28 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd28. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD28 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD28 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd28 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd28 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.