CCS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402130

Descripción general

CCS (chaperona de cobre para la superóxido dismutasa) es una metalochaperona citosólica que entrega cobre a SOD1 y promueve su maduración mediante interacción directa y la formación de enlaces disulfuro. Al posibilitar la actividad adecuada de SOD1, CCS sostiene la defensa antioxidante celular y limita el daño oxidativo derivado de la respiración mitocondrial y de otros procesos redox-activos. La función de CCS está vinculada a la homeostasis del cobre y a la señalización redox, con efectos posteriores sobre vías sensibles al estrés que influyen en la estabilidad proteica y la viabilidad celular. La desregulación del eje CCS–SOD1 se ha estudiado en contextos de biología del estrés oxidativo y neurodegeneración, donde las alteraciones en el manejo de metales y las especies reactivas de oxígeno contribuyen a fenotipos asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CCS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CCS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCS para la investigación de la señalización de CCS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCS críticos para la función de CCS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CCS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CCS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CCS (h) y el plásmido HDR CCS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.