CA VI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419456

Visão geral

Car6 codifica a anidrase carbônica VI (CA VI), uma metaloenzima secretada dependente de zinco que catalisa a hidratação reversível do CO₂ em bicarbonato e prótons, sustentando o tamponamento do pH extracelular e a homeostase do bicarbonato em ambientes glandulares e mucosos. Ao modular a dinâmica de prótons, a CA VI contribui para processos ligados ao transporte iônico epitelial e ao controle do pH do microambiente, o que pode influenciar a atividade enzimática, as interações com a matriz e a sinalização celular. Em sistemas murinos, a expressão de Car6 é frequentemente utilizada para estudar a regulação, dependente de anidrase carbônica, do equilíbrio ácido–base extracelular em tecidos secretórios. A desregulação do controle de pH é amplamente relevante para modelos de inflamação, remodelamento tecidual e estresse metabólico, tornando Car6 um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos sensíveis ao pH.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CA VI (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Car6 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Car6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Car6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CA VI.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Car6 para a investigação da sinalização de CA VI, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Car6 críticos para a função CA VI
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Car6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CA VI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CA VI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Car6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CA VI Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CA VI (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Car6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Car6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.