BPI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404909

Panoramica

La BPI (proteina battericida/aumento della permeabilità, *bactericidal/permeability-increasing protein*) è un fattore dell’immunità innata mucosale presente nei granuli dei neutrofili, con elevata affinità per il lipopolisaccaride (LPS) dei batteri Gram-negativi, dove neutralizza l’attività endotossinica e favorisce l’uccisione batterica compromettendo l’integrità della membrana esterna. Legandosi all’LPS e modulando le interazioni con la LPS-binding protein e con i componenti di segnalazione CD14/TLR4, la BPI può influenzare le risposte infiammatorie a valle e la produzione di citochine. L’espressione e l’attività della BPI vengono comunemente valutate nel contesto delle interazioni ospite–patogeno, della degranulazione dei neutrofili e della difesa di barriera. Una gestione disfunzionale dell’LPS e livelli alterati di BPI sono stati studiati in condizioni infiammatorie delle vie aeree e gastrointestinali, nella biologia della sepsi e nella suscettibilità alle infezioni da Gram-negativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BPI (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BPI in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BPI insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BPI a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BPI.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BPI per lo studio della segnalazione di BPI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BPI critici per la funzione di BPI
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BPI per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BPI. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BPI Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BPI (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BPI per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BPI definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.