BMAL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435462

Panoramica

Arntl2 codifica BMAL2, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix PAS che forma eterodimeri con CLOCK/NPAS2 per regolare l’espressione genica guidata da E-box e coordinare i programmi trascrizionali circadiani e metabolici nei tessuti del topo. BMAL2 influenza i circuiti centrali dell’orologio biologico, la regolazione ritmica della cromatina e vie a valle, tra cui l’omeostasi redox, il metabolismo dei lipidi e del glucosio e la temporizzazione del ciclo cellulare, attraverso il controllo trascrizionale dei geni regolati dall’orologio. La disregolazione delle reti associate ad ARNTL2/BMAL2 è stata collegata in letteratura ad alterazioni della segnalazione infiammatoria, delle risposte allo stress e a cambiamenti nella migrazione e nella differenziazione cellulare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della disruption circadiana. Modelli in vivo e cellulari implicano BMAL2 nell’output dell’orologio specifico di tessuto e nell’adattamento a segnali ambientali, supportandone l’uso nella ricerca su neurobiologia, metabolismo e stati trascrizionali associati ai tumori, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMAL2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Arntl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Arntl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Arntl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMAL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Arntl2 per lo studio della segnalazione di BMAL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Arntl2 critici per la funzione di BMAL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Arntl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMAL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BMAL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Arntl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMAL2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BMAL2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Arntl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Arntl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.