BMAL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435462

Übersicht

Arntl2 kodiert BMAL2, einen Transkriptionsfaktor der basischen Helix-Loop-Helix-PAS-Familie, der mit CLOCK/NPAS2 Heterodimere bildet, um die E-Box-getriebene Genexpression zu regulieren und zirkadiane sowie metabolische Transkriptionsprogramme in Mausgeweben zu koordinieren. BMAL2 beeinflusst die Kernschaltkreise der Uhr, die rhythmische Chromatinregulation und nachgeschaltete Signalwege, darunter Redoxhomöostase, Lipid- und Glukosestoffwechsel sowie das Timing des Zellzyklus, über die transkriptionelle Kontrolle uhrgesteuerter Gene. Eine Fehlregulation von ARNTL2/BMAL2-assoziierten Netzwerken wird in der Literatur mit veränderter inflammatorischer Signalgebung, Stressantworten sowie Veränderungen der Zellmigration und -differenzierung in Verbindung gebracht, was BMAL2 für mechanistische Studien zur zirkadianen Dysregulation relevant macht. In-vivo- und Zellmodelle deuten darauf hin, dass BMAL2 an gewebespezifischen Uhr-Outputs und der Anpassung an Umweltreize beteiligt ist, was seinen Einsatz in der Forschung zu Neurobiologie, Stoffwechsel und tumorassoziierten transkriptionellen Zuständen unterstützt, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.

Das BMAL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Arntl2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Arntl2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Arntl2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BMAL2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Arntl2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BMAL2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Arntl2-Exone abzielen, die für die BMAL2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Arntl2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BMAL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BMAL2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Arntl2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BMAL2 HDR-Plasmid (m) und BMAL2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Arntl2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Arntl2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.