bassoon Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406918

Panoramica

BSN codifica la bassoon, una grande proteina di impalcatura della matrice citomatricale presinaptica che organizza la zona attiva e sostiene un rilascio efficiente dei neurotrasmettitori. Bassoon contribuisce all’ancoraggio (docking) e al priming delle vescicole sinaptiche, accoppiando i pool di vescicole sinaptiche all’ingresso di Ca²⁺ mediato da canali voltaggio-dipendenti e coordinando le interazioni con altri componenti della zona attiva durante la sinaptogenesi e il mantenimento delle sinapsi. Grazie al suo ruolo nell’assemblaggio presinaptico e nella dinamica del ciclo delle vescicole, BSN è studiato nei pathway che regolano la connettività neuronale, la plasticità sinaptica e la neurotrasmissione dipendente dall’attività. Alterazioni dell’organizzazione sinaptica associata a bassoon sono state investigate nel contesto di meccanismi di malattie del neurosviluppo e neuropsichiatriche, in cui la disfunzione presinaptica rappresenta un fenotipo cellulare comune.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO bassoon (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BSN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BSN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BSN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina bassoon.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BSN per lo studio della segnalazione di bassoon, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BSN critici per la funzione di bassoon
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BSN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal bassoon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal bassoon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BSN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal bassoon Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR bassoon (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BSN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BSN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.