BACE2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425013

Panoramica

Bace2 codifica l’enzima murino β-site APP-cleaving enzyme 2 (BACE2), una proteasi aspartilica transmembrana di tipo I che partecipa alla proteolisi intramembrana regolata di specifici substrati nelle vie secretorie ed endosomali. L’attività di BACE2 influenza la proteostasi e la maturazione delle proteine di membrana, intersecandosi con il traffico vescicolare, il turnover lisosomiale e le risposte cellulari allo stress legate alla fisiologia neuronale e metabolica. Nel sistema nervoso centrale, BACE2 è stata studiata nel contesto della processazione della famiglia della proteina precursore dell’amiloide e della generazione di peptidi, contribuendo alla ricerca su vie implicate nella neurodegenerazione. Nei tessuti periferici, incluse le isole pancreatiche, il clivaggio dei substrati associato a BACE2 è stato collegato alla funzione delle cellule β, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BACE2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bace2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bace2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bace2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BACE2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bace2 per lo studio della segnalazione di BACE2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Bace2 critici per la funzione di BACE2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bace2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BACE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BACE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bace2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BACE2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BACE2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bace2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bace2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.