ANP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400723

Panoramica

NPPA codifica per il peptide natriuretico atriale (ANP), un ormone di origine cardiaca che regola il volume ematico e il tono vascolare attraverso i recettori dei peptidi natriuretici e la segnalazione a valle cGMP/PKG. L’ANP promuove natriuresi, diuresi e vasodilatazione e modula l’attività dell’asse renina–angiotensina–aldosterone, collegando la rilevazione dello stiramento miocardico all’omeostasi sistemica dei fluidi e degli elettroliti. L’espressione di NPPA è strettamente controllata nei cardiomiociti ed è indotta dinamicamente durante il rimodellamento da stress cardiaco. Una segnalazione NPPA/ANP deregolata è associata a fisiopatologie cardiovascolari, tra cui ipertensione, ipertrofia cardiaca e insufficienza cardiaca, rendendola un nodo chiave per studi meccanicistici della regolazione cardiometabolica ed emodinamica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPPA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPPA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPPA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPPA per lo studio della segnalazione di ANP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPPA critici per la funzione di ANP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPPA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ANP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPPA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ANP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPPA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPPA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.