Angiotensinogen Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419047

Panoramica

Il gene Agt del topo codifica l’angiotensinogeno, una glicoproteina secreta di origine epatica che funge da precursore dei peptidi dell’angiotensina all’interno del sistema renina–angiotensina (RAS). La proteolisi mediata dalla renina e dall’enzima di conversione dell’angiotensina genera angiotensine bioattive che regolano il tono vascolare, l’omeostasi di sodio e dei fluidi e la segnalazione endocrina a livello di rene, surrene, cuore e cervello. L’attività del RAS mediata dall’angiotensinogeno interagisce con le vie dell’infiammazione e dello stress ossidativo e influenza il rimodellamento tissutale e la fibrosi tramite la segnalazione dell’angiotensina II. La deregolazione dell’espressione o della processazione di Agt è ampiamente utilizzata come punto di accesso meccanicistico per studiare la fisiopatologia cardiovascolare e renale, le risposte allo stress metabolico e il cross-talk tra organi in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Angiotensinogen (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Angiotensinogen.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agt per lo studio della segnalazione di Angiotensinogen, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agt critici per la funzione di Angiotensinogen
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Angiotensinogen CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Angiotensinogen CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Angiotensinogen Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Angiotensinogen (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.