A-Myb Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404328

Panoramica

MYBL1 codifica il fattore di trascrizione A-Myb, una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che regola programmi di espressione genica collegati alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione e alla proliferazione limitata a specifiche linee cellulari. A-Myb opera all’interno di reti trascrizionali che controllano processi associati alla cromatina e la segnalazione dei checkpoint, influenzando l’espressione di geni coinvolti nella replicazione del DNA e nell’ingresso in mitosi. Un’attività di MYBL1 deregolata o un contesto regolatorio alterato sono stati associati a stati proliferativi aberranti e a programmi trascrizionali oncogenici in molteplici tipi di tessuto. In quanto regolatore trascrizionale nucleare, A-Myb è spesso studiato per il suo ruolo nel collegare segnali di sviluppo a output trascrizionali coordinati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO A-Myb (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYBL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYBL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYBL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina A-Myb.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYBL1 per lo studio della segnalazione di A-Myb, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MYBL1 critici per la funzione di A-Myb
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYBL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal A-Myb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal A-Myb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYBL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal A-Myb Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR A-Myb (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYBL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYBL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.