β-FR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403346

Descripción general

FOLR2 codifica el receptor beta de folato (β-FR), un receptor de superficie celular anclado a glicosilfosfatidilinositol que se une a los folatos y media su captación, apoyando el metabolismo de un carbono y la biosíntesis de nucleótidos. Mediante la regulación de la disponibilidad intracelular de folato, β-FR influye en la síntesis de ADN y en procesos dependientes de la metilación que se entrecruzan con programas de proliferación y diferenciación. En humanos, FOLR2 se utiliza con frecuencia como marcador de subpoblaciones específicas de células mieloides y macrófagos, y se estudia en contextos en los que se remodelan el metabolismo dependiente de folato y el estado de las células inmunitarias. Los patrones alterados de expresión de FOLR2 se asocian con microambientes inflamatorios y con una remodelación inmunitaria relevante para la enfermedad, lo que impulsa estudios mecanísticos en células primarias y sistemas modelo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-FR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FOLR2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FOLR2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FOLR2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-FR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FOLR2 para la investigación de la señalización de β-FR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FOLR2 críticos para la función de β-FR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FOLR2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-FR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β-FR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FOLR2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-FR (h) y el plásmido HDR β-FR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FOLR2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FOLR2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.