α_1A-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401726-ACT

ADRA1A codifica o receptor adrenérgico alfa-1A humano (α1A-AR), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, elevar o Ca2+ intracelular e estimular a sinalização dependente de PKC. Os efeitos a jusante incluem a modulação da contratilidade do músculo liso, da secreção e da excitabilidade neuronal por vias dependentes de cálcio e pela sinalização MAPK/ERK. O α1A-AR participa da regulação do tônus vascular e da função do músculo liso geniturinário mediada por catecolaminas, e sua sinalização se cruza com redes mais amplas de resposta ao estresse adrenérgico. Alterações na expressão de receptores adrenérgicos ou na dinâmica de sua sinalização têm sido implicadas em fenótipos cardiovasculares e neurofisiológicos, sustentando pesquisas sobre respostas transcricionais dependentes de receptores e de segundos mensageiros.

α1A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRA1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α1A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRA1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRA1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α1A-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRA1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α1A-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α1A-AR em células tumorais com expressão de ADRA1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.