Quando un composto attiva con successo il promotore, induce l'espressione del gene reporter, dando luogo a un segnale osservabile. L'intensità di questo segnale è correlata con il livello di attivazione del promotore e, per procura, con l'efficacia del composto come attivatore. I composti che causano un aumento significativo del segnale del reporter vengono quindi selezionati per una valutazione più dettagliata. Il processo di screening è fondamentale per isolare le entità chimiche che possono modulare efficacemente l'espressione genica, fornendo un punto di partenza per un'ulteriore caratterizzazione. Dopo la fase iniziale di HTS, gli attivatori putativi di 2610003J06Rik vengono sottoposti a una serie di test di validazione per confermare le loro proprietà di attivazione genica. La reazione a catena della polimerasi quantitativa (qPCR) è una delle principali tecniche utilizzate in questa fase. Essa quantifica i livelli di mRNA del gene 2610003J06Rik dopo l'interazione con il composto; un aumento dell'mRNA indica che il composto è in grado di upregolare l'espressione genica a livello trascrizionale. A complemento della qPCR, viene condotta un'analisi Western blot per determinare se l'aumento osservato nei livelli di mRNA si traduce in un aumento della proteina codificata dal gene. Questa tecnica prevede la separazione delle proteine mediante elettroforesi su gel, il loro trasferimento su una membrana e la successiva analisi con anticorpi specifici per la proteina target. Queste fasi di validazione -qPCR e Western blot- sono indispensabili nel processo di caratterizzazione, in quanto assicurano collettivamente che un composto chimico non solo aumenti la trascrizione del gene 2610003J06Rik, ma porti anche a un corrispondente aumento della sintesi proteica. Questo approccio a più livelli garantisce che il ruolo di attivatore di un composto sia accuratamente comprovato da prove a diversi livelli di regolazione dell'espressione genica.
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| Nome del prodotto | CAS # | Codice del prodotto | Quantità | Prezzo | CITAZIONI | Valutazione |
|---|---|---|---|---|---|---|
IBMX | 28822-58-4 | sc-201188 sc-201188B sc-201188A | 200 mg 500 mg 1 g | $159.00 $315.00 $598.00 | 34 | |
L'IBMX è un inibitore non specifico delle fosfodiesterasi, con conseguente aumento dei livelli di cAMP e cGMP. Questo potenzia i percorsi PKA e PKG, potenzialmente aumentando l'attività di 2610003J06Rik attraverso eventi di fosforilazione. | ||||||
PMA | 16561-29-8 | sc-3576 sc-3576A sc-3576B sc-3576C sc-3576D | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg 100 mg | $40.00 $129.00 $210.00 $490.00 $929.00 | 119 | |
Il PMA è un attivatore PKC che potrebbe potenziare l'attività di 2610003J06Rik attivando la proteina chinasi C, che potrebbe poi influenzare le vie di segnalazione o gli elementi strutturali associati alla funzione di 2610003J06Rik. | ||||||
A23187 | 52665-69-7 | sc-3591 sc-3591B sc-3591A sc-3591C | 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg | $54.00 $128.00 $199.00 $311.00 | 23 | |
A23187 è uno ionoforo di calcio che aumenta i livelli di calcio intracellulare, potenzialmente migliorando l'attività di 2610003J06Rik attraverso vie di segnalazione calcio-dipendenti che interagiscono o modificano la funzione della proteina. | ||||||
Ionomycin | 56092-82-1 | sc-3592 sc-3592A | 1 mg 5 mg | $76.00 $265.00 | 80 | |
La ionomicina agisce come ionoforo del calcio, analogamente all'A23187, aumentando il calcio intracellulare e attivando le chinasi calcio-dipendenti, che potrebbero portare all'attivazione di 2610003J06Rik. | ||||||
(−)-Epigallocatechin Gallate | 989-51-5 | sc-200802 sc-200802A sc-200802B sc-200802C sc-200802D sc-200802E | 10 mg 50 mg 100 mg 500 mg 1 g 10 g | $42.00 $72.00 $124.00 $238.00 $520.00 $1234.00 | 11 | |
L'EGCG è noto per inibire alcuni tipi di protein-chinasi, alterando potenzialmente le vie di segnalazione per favorire l'attivazione di 2610003J06Rik riducendo i segnali regolatori competitivi o negativi. | ||||||
LY 294002 | 154447-36-6 | sc-201426 sc-201426A | 5 mg 25 mg | $121.00 $392.00 | 148 | |
LY294002 è un inibitore di PI3K, in grado di modulare la via PI3K/Akt, potenzialmente alleviando il controllo inibitorio sulle vie di cui 2610003J06Rik fa parte, potenziandone così l'attività. | ||||||
SB 203580 | 152121-47-6 | sc-3533 sc-3533A | 1 mg 5 mg | $88.00 $342.00 | 284 | |
SB203580 è un inibitore di p38 MAPK, che può spostare l'equilibrio della segnalazione cellulare verso percorsi che potenziano indirettamente l'attività di 2610003J06Rik, inibendo percorsi di risposta allo stress concorrenti. | ||||||
Spermine | 71-44-3 | sc-212953A sc-212953 sc-212953B sc-212953C | 1 g 5 g 25 g 100 g | $60.00 $192.00 $272.00 $883.00 | 1 | |
La spermina è una poliammina in grado di modulare la funzione dei canali ionici e di influenzare le vie di segnalazione che regolano o interagiscono con 2610003J06Rik, determinandone una maggiore attività. | ||||||
Zaprinast (M&B 22948) | 37762-06-4 | sc-201206 sc-201206A | 25 mg 100 mg | $103.00 $245.00 | 8 | |
Zaprinast inibisce le fosfodiesterasi, in particolare la PDE5, determinando un aumento dei livelli di cGMP, che potrebbe potenziare l'attività di 2610003J06Rik attraverso l'attivazione della proteina chinasi cGMP-dipendente. | ||||||
Y-27632, free base | 146986-50-7 | sc-3536 sc-3536A | 5 mg 50 mg | $182.00 $693.00 | 88 | |
Y-27632 è un inibitore di ROCK, che può portare a cambiamenti nelle dinamiche citoscheletriche e nelle vie della motilità cellulare, potenzialmente aumentando l'attività di 2610003J06Rik se è coinvolto in questi processi. | ||||||