Gene Silencers

Santa Cruz Biotechnology now offers target-specific CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmids, CRISPR Double Nickase Plasmids, CRISPR/ dCas9 Activation Plasmids and CRISPR Lenti Activation Systems for over 18,910 human and 18,340 mouse protein encoding genes.

RNAi - Historique

L'interférence par RNA (RNAi) a été identifiée pour la première fois dans des C. elegans par les lauréats du prix Nobel Fire and Mello (1), et est actuellement l'une des découvertes les plus prometteuses en biologie moléculaire. L'activité endogène des RNAi a été liée à la régulation de la mobilité des transposons(2), la détermination des profils d'expression des gènes (3) et du devenir cellulaire (4). C'est une composante essentielle de la défense cellulaire innée contre l'infection virale in vivo(5). Trois mécanismes RNAi uniques contrôlant l'expression des gènes cibles ont été démontrés. Le RNAi régule la transcription des gènes en modifiant la formation d'hétérochromatine (6). Le RNAi exerce deux formes de contrôle post-transcriptionnels. Premièrement, l'RNAi peut inhiber la traduction de l'ARNm cible (7) et deuxièmement, l'RNAi peut diriger la destruction de l'ARNm cible par le complexe RISC (8). La protéine DICER produit les dsRNA, laissant deux nucléotides de plus au niveau du brin 3'. Ces amorces de dsRNA sont alors transférées au complexe RISC et conduit à l'activation de l'activité enzymatique de l'Argonaute, le composant RNase du complexe RISC qui détruit l'un des brins d'ARN. Le brin guide restant conduit alors le complexe RISC, par liaison complémentaire, à s'associer avec les molécules d'ARN cible et à les cliver.

La découverte des RNAi a introduit un outil de laboratoire extraordinairement puissant pour les chercheurs et est devenu un outil thérapeutique potentiel prometteur. C'est ainsi que Andrew Z. Fire et Craig C. Mello reçurent le prix Nobel 2006 de physiologie et de médecine. En laboratoire, les molécules d'RNAi sont utilisées pour réguler négativement l'expression de gènes cibles spécifiques dans une variété d'organismes et de différents types cellulaires, en exploitant chacun des trois mécanismes de l'inhibition de l'expression des gènes décrits ci-dessus. Ces techniques sont utiles pour la manipulation d'un système expérimental pour explorer des gènes spécifiques et les fonctions des protéines ainsi que leurs relations à d'autres gènes et des protéines. L'RNAi possède également un potentiel clinique passionnant (9).

Les détails de ces mécanismes RNAi sont des sujets populaires d'études rigoureuses, même si beaucoup restent encore à clarifier. Le contrôle RNAi de la dégradation de l'ARNm cible par le complexe RISC, cependant, est le mieux décrit ainsi que le mécanisme destiné aux RNAi Gene Silencers.

Santa Cruz Biotechnology, Inc. offre une gamme complète de RNAi Gene Silencers, dont les siRNAs, Plasmides shRNA et Particules Lentivirales shRNA sont disponibles pour >99% des gènes codants humains et des gènes codants de souris.

Produits de l'RNA offerts par Santa Cruz Biotechnology, Inc.

siRNA Gene Silencers

siRNA description:

  • siRNA signifie 'small' ou 'short interfering' RNA - petits ARN interférents
  • Nécessite la transfection des cellules par un agent de transfection à base lipidique
  • Pour l'inhibition du gène cible transitoire

siRNA product details:

  • Les siRNA Gene Silencers sont composés d'un mélange de trois séquences courtes de RNA double brin différentes. Chaque séquence double brin comprend 19-25 nucléotides (nt) avec un excédent 2-nt à l'extrémité 3'.
  • 10 µM, 50-100 transfections
  • pour une vérification individuelle des résultats, chacun des doubles brins siRNA isolés sont également disponibles sur demande

Support Products for siRNA Gene Silencers:

  • anticorps de contrôle disponibles
  • RT-PCR Primers disponibles
  • siRNA Dilution Buffer, sc-29527
  • siRNA Transfection Reagent, sc-29528
  • siRNA Transfection Medium, sc-36868
  • siRNA Reagent System, sc-45064
  • Control siRNAs, including Control siRNA-A, sc-37007
  • Control siRNA (FITC Conjugate)-A, sc-36869
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Comment fonctionnent les siRNA Gene Silencers?

Download siRNA Protocols

FGF-19 siRNA (h): sc-39480

CD9 siRNA (h): sc-35032

Daxx siRNA (h): sc-35178

Cdc6 siRNA (h): sc-29258

cytochrome c siRNA (h): sc-29292

cPLA2 siRNA (h): sc-29280

ERK 1 siRNA (m): sc-29308

c-Src siRNA (h): sc-29228

p53 siRNA (h): sc-29435

Lamin A/C siRNA (h): sc-35776

Plasmide shRNA Gene Silencers

shRNA Plasmid description:

  • shRNA signifie 'small hairpin' ou 'short hairpin' ARN
  • Les plasmides codant pour des shRNA intègrent la cellule par transfection à base de lipides
  • Les plasmides shRNA peuvent induire une inhibition transitoire ou stable du gène cible
  • Les Plasmides shRNA sont composés d'un mélange de 3 à 5 plasmides de vecteurs lentiviraux d'expression individuels. Chaque vecteur code pour une séquence spécifique de shRNA d'une longueur de 19-25 nucléotides (nt) plus une épingle à cheveux (hairpin loop) de 6 paires de bases (bp).
  • 20 µg, jusqu'à 20 transfections
  • La transcription de shRNA est contrôlée par le promoteur H1
  • l'ADN plasmidique est purifié et prêt à l'usage
  • Après la transfection, les cellules avec l'expression stable de shRNA, peuvent être selectionées par traitement de puromycine

Support Products for shRNA Plasmid Gene Silencers:

  • anticorps de contrôle disponibles
  • RT-PCR Primers disponibles
  • shRNA Plasmid Transfection Reagent, sc-108061
  • shRNA Plasmid Transfection Medium, sc-108062
  • Control shRNA Plasmid-A, sc-108060
  • Control shRNA Plasmid-B, sc-108065
  • Control shRNA Plasmid-C, sc-108066

Confirm shRNA Plasmid Gene Silencer transfection efficiency with copGFP Control Plasmid: sc-108083

Generate Cells with stable expression of shRNA

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Comment fonctionnent les Plasmides shRNA ?

Download shRNA Protocols

IL-1α shRNA Plasmid (h): sc-39613-SH

PTN shRNA Plasmid (m): sc-39714-SH

TCF-4 shRNA Plasmid (h): sc-43525-SH

MIS shRNA Plasmid (h): sc-39793-SH

VEGF-D shRNA Plasmid (h): sc-39844-SH

Amylase shRNA Plasmid (h): sc-29675-SH

FGF-19 shRNA Plasmid (h): sc-39480-SH

MMP-9 shRNA Plasmid (h): sc-29400-SH

BMP-4 shRNA Plasmid (h): sc-39744-SH

Cyr61 shRNA Plasmid (h): sc-39331-SH

Particules Lentivirales shRNA

shRNA Lentiviral Particle description:

  • shRNA signifie 'small hairpin' ou 'short hairpin' ARN
  • Les Particules Lentivirales fournissent aux cellules cibles un plasmide codant pour un shRNA
  • Permettent un knock-down transitoire ou stable du gène cible
  • Les Particules Lentivirales sont fournies en tant que virus prêt à la transduction pour l'inhibition de l'expression d'un gène dans des cellules cibles mammaliennes (humain, murin ou rat)
  • 200 µl de particules virales congelées contenant 106 unités virales infectieuses (IFU), suffisant pour 10-20 transductions
  • Les Particules Lentivirales contiennent généralement 3 à 5 vecteurs d'expression. Chaque vecteur code pour une séquence spécifique de shRNA de 19-25 nt avec une boucle de 6 pb.
  • Après la transduction, les cellules exprimant de façon stable les shRNA peuvent être sélectionnées par traitement à la puromycine
  • Les Particules Lentivirales de Contrôle copGFP: sc-108084 permettent de confirmer l'efficacité de la transduction des Particules Lentivirales dans une population de cellules cibles en détectant la copGFP par cytométrie en flux ou par microscopie à fluorescence.
  • L'utilisation des Particules Lentivirales shRNA a un double avantage: la possibilité d'introduire des shRNA à tous type de cellules tout en évitant les méthodes de transfection trop contraignantes.
  • Biosécurité - Les Particules Lentivirales sont incompétentes à la réplication et sont conçues pour s'auto-inactiver après transduction et intégration des shRNA dans l'ADN génomique de cellules cibles.

Support Products for shRNA Lentiviral Particle Gene Silencers:

  • anticorps de contrôle disponibles
  • RT-PCR Primers disponibles
  • Control shRNA Lentiviral Particles: sc-108080
  • copGFP Control Lentiviral Particles: sc-108084
  • Puromycin dihydrochloride: sc-108071

Generate Cells with stable expression of shRNA

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Comment fonctionnent les Particules Lentivirales?

Download Lentiviral Protocols

Utiliser un contrôle de transduction efficace

Particules Lentivirales copGFP de Contrôle

293T cells stably transduced with copGFP Control Lentiviral Particles (sc-108084) compared with non-transduced 293T cells as a negative control.


PNP shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-45991-V

ephrin-A1 shRNA (m) Lentiviral Particles: sc-39427-V

MCP-4 shRNA Plasmid (h): sc-72122-SH

TNFβ shRNA Plasmid (h): sc-37218-SH

Somatostatin shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-39728-V

Fos B shRNA (h) Lentiviral Particles: sc-35403-V

Foire aux questions

  • Quel est l'avantage de shRNA par rapport aux siRNA?

    La transfection de siRNA Gene Silencers dans des cellules en culture permet une diminution rapide et efficace, même si à court terme, de l'expression du gène cible. On peut obtenir une inhibition stable en utilisant des plasmides shRNA ou des Particules Lentivirales shRNA suivi par une sélection à la puromycine. Ainsi, pour "éteindre" l'expression d'une protéine à faible expression, les plasmides shRNA ou les Particules Lentivirales shRNA seront le choix idéal.

  • Quel sont les avantages des shRNA par rapport aux siRNA?

    La transfection de siRNA Gene Silencers dans des cellules en culture permet une diminution rapide et efficace, même si à court terme, de l'expression du gène cible. On peut obtenir une inhibition stable en utilisant des plasmides shRNA ou des Particules Lentivirales shRNA suivi par une sélection à la puromycine. Ainsi, pour réduire l'expression d'une protéine à faible expression, les plasmides shRNA ou les Particules Lentivirales shRNA seront le choix idéal.

  • Les Particules Lentivirales shRNA posent-elles des questions de bio-sécurité?

    Les Particules Lentivirales peuvent être utilisées dans les laboratoire de biosécurité niveau 2 de culture de tissus (et doivent être traitées avec la même prudence que tout autre réactif potentiellement infectieux). Les Particules Lentivirales sont incompétentes à la réplication et sont conçues pour s'auto-inactiver après transduction et intégration des shRNA dans l'ADN génomique des cellules cibles.

  • Les séquences utilisées dans les Plasmides shRNA et les Paricules Lentivirales shRNA sont-elles identiques aux siRNA correspondants, dirigés contre le même gène? Donnez-vous ces séquences?

    Oui. Les séquences encodées dans nos Plasmides shRNA sont les mêmes que celles utilisées dans les produits correspondants de siRNA Gene Silencer. Ces séquences sont disponibles sur demande pour notre clientèle. Pour cela, nous vous invitons à contacter notre service technique.

  • Les Plasmide shRNA comportent un mélange de trois à cinq plasmides différents. Sont-ils livrés en flacons séparés? Chaque plasmide shRNA d'un pool peut-il être vendu séparément?

    Les produits plasmidiques shRNA sont fournis en un seul flacon. Nous pouvons fournir les brins de siRNA individuels sur demande. Il est possible de commander les plasmides séparément après l'achat du pool.

  • Quel type de vecteur lentiviral utilisez-vous? Quel est le "nom de ce vecteur"?

    Le vecteur lentiviral que nous utilisons est un vecteur exclusif de chez Santa Cruz Biotechnology. Si vous souhaitez plus d'information, veuillez nous contacter en nous précisant le but de cette requête. Nous pourrions être en mesure de répondre à votre question sans avoir à divulguer des informations confidentielles.

  • Quel type de promoteur est utilisé dans votre vecteur pour effectuer la transcription shRNA?

    Le vecteur utilise un promoteur H1.

  • Quel type de marqueur de sélection est utilisé dans votre vecteur?

    Le vecteur possède un gène de résistance à la puromycine codant l'enzyme puromycine N-acétyltransférase pour la sélection des cellules ayant été transfectées ou transduites avec succès.

  • Comment propager le vecteur de plasmide lentiviral?

    Le Plasmides shRNA et les Particules Lentivirales shRNA sont vendus prêts à la transfection/transduction. Aucune préparation n'est nécessaire. Les shRNA Gene Silencers sont des produits consommables ainsi nous ne fournissons pas de protocole de propagation.

  • Que signifie copGFP et comment l'utiliser avec les plasmides shRNA et les Particules Lentivirales?

    Administrer le plasmide copGFP ou des particules lentivirales copGFP à un échantillon de cellules cibles permet d'évaluer l'efficacité de la transfection ou de la transduction virale pour la population de cellules cibles. Le plasmide copGFP et les particules lentivirales copGFP conduisent à l'expression de la protéine fluorescente verte copépodes. Cette protéine peut alors être détectée en utilisant un microscope à fluorescence ou un cytomètre en flux.

  • Quelle est la différence entre les produits shRNA (h) et (h2) (p. ex. E-Cadherin, sc-35242-SH et sc-44222-SH?

    Les produits (h) et (h2) sont conçus pour réduire l'expression du même gène humain, mais ont des séquences qui diffèrent.

  • Quels produits supplémentaires et quel agent de transfection faut-il utiliser avec les Plamides shRNA de Santa Cruz Biotechnology?

    Nous recommandons pour l'utilisation de nos Plasmides shRNA: notre réactif de transfection Plasmides shRNA, sc-108061, ainsi que le milieu de transfection Plasmides shRNA, sc-108062. Nous recommandons également l'un de nos contrôles Plasmides shRNA, soit sc-108060 (A), SC-108065 (B) ou sc-108066 (C). Ces séquences de shRNA ne ciblent pas les ARNm connus chez les mammifères.

Références

  1. Fire, A., Xu, S.Q., Montgomery, M.K., Kostas, S.K., Driver, S.E. and Mello, C.C. 1998. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391: 806-811.

  2. Das, P.P., Bagijn M.P., Goldstein, L.D., Woolford, J.R., Lehrbach, N.J., Sapetschnig, A., Buhecha, H.R., Gilchrist, M.J., Howe, K.L., Stark, R., Matthews, N., Berezikov, E., Ketting, R.F., Tavaré, S. and Miska E.A. 2008. Piwi and piRNAs Act Upstream of an Endogenous siRNA Pathway to Suppress Tc3 Transposon Mobility in the Caenorhabditis elegans Germline. Mol Cell 31: 79-90.

  3. Kawasaki, H., Taira, K. and Morris, K.V. 2005. siRNA Induced Transcriptional Gene Silencing in Mammalian Cells. Cell Cycle 4: 442-448.

  4. Georgantas III, R.W., Hildreth, R., Morisot, S., Alder, J., Liu, C.G., Heimfeld, S., Calin, G.A., Croce, C.M. and Civin, C.I. 2007. CD34+ hematopoietic stem-progenitor cell microRNA expression and function: A circuit diagram of differentiation control. PNAS 104: 2750-2755.

  5. Chotkowskia, H.L., Ciotab, A.T., Jiab, Y., Puig-Basagoitic, F., Kramerb, L.D., Shic, P.Y. and Glaser, R.L. 2008. West Nile virus infection of Drosophila melanogaster induces a protective RNAi response. Virology 377: 197-206.

  6. Kawasaki, H., Taira, K. and Morris, K.V. 2005. siRNA Induced Transcriptional Gene Silencing in Mammalian Cells. Cell Cycle 4: 442-448.

  7. Tamura, Y., Yoshida, M., Ohnishi, Y. and Hohjoh, H. 2008. Variation of gene silencing involving endogenous microRNA in mammalian cells. Mol Biol Rep, epub.

  8. Hammond,S.M., Boettcher, S., Caudy, A.A., Kobayashi, R. and Hannon, G.J. 2001. Argonaute2, a Link Between Genetic and Biochemical Analyses of RNAi. Science 293: 1146-1150.

  9. Zhanga, Y., Yanga, H., Xiaoa, B., Wub, M., Zhoua, W., Lia, J., Lib, G. and Christados, P. 2008. Dendritic cells transduced with lentiviral-mediated RelB-specific ShRNAs inhibit the development of experimental autoimmune myasthenia gravis. Mol Imunol, epub.

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