Plasmide CRISPR d'Activation (m) α_1A-AR: sc-419021-ACT

Le gène murin **Adra1a** code le récepteur adrénergique **alpha1A** (α1A-AR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à **Gq/11** pour activer la phospholipase C, augmenter la signalisation **IP3/DAG**, mobiliser le **Ca2+** intracellulaire et stimuler des réponses dépendantes de la **PKC**. La signalisation de l’α1A-AR module le tonus du muscle lisse, la résistance vasculaire et la régulation sympathique dans les tissus cardiovasculaires et urogénitaux, et influence également l’excitabilité neuronale ainsi que la signalisation synaptique dans le système nerveux central. L’activation des voies en aval s’entrecroise avec la signalisation **MAPK/ERK** et des programmes transcriptionnels contrôlant la contraction, le métabolisme et les réponses au stress. Une activité des récepteurs adrénergiques dérégulée et une expression altérée des récepteurs ont été impliquées dans des modèles d’hypertension, de dysfonction du bas appareil urinaire et de phénotypes neurocomportementaux, ce qui fait d’**Adra1a** une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation sympathique.

α1A-AR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adra1a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α1A-AR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adra1a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adra1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α1A-AR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adra1a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α1A-AR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α1A-AR dans les cellules tumorales présentant une expression de Adra1a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.