Gen Silencer

RNAi Produkte von Santa Cruz Biotechnology, Inc.

siRNA Gen Silencer

siRNA description:

• siRNA bedeutet small interfering oder short interfering RNA
• Die Transfektion der Zellen muss mit einem Lipid-basierenden Transfektionsreagenz erfolgen.
• Für transientes Gen Silencing

siRNA product details:

• Die angebotenen siRNAs enthalten doppelsträngige RNA mit einer Länge von jeweils 20-25 nt mit 2-nt 3' Überhängen an jedem Ende.
• 10 µM, 50-100 Transfektionen
• Zur unabhängigen und genaueren Überprüfung der mit unseren siRNA erhaltenen Ergebnisse zum Silencing der Gene bieten wir auf Anfrage auch gerne die enthaltenen, doppelsträngigen siRNAs separat ebenfalls als 3 nmol lyophilisierte siRNA an.

Support Products for siRNA Gene Silencers:

• Es werden geeignete Primärantikörper zur Kontrolle angeboten
• RT-PCR Primer
• siRNA Dilution Buffer, sc-29527
• siRNA Transfection Reagent, sc-29528
• siRNA Transfection Medium, sc-36868
• siRNA Reagent System, sc-45064
• Control siRNAs, including Control siRNA-A, sc-37007
• Control siRNA (FITC Conjugate)-A, sc-36869

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Wie ist die Funktionsweise der siRNA Gen Silencer?

Download siRNA Protocols

FGF-19 siRNA (h): sc-39480

CD9 siRNA (h): sc-35032

Daxx siRNA (h): sc-35178

Cdc6 siRNA (h): sc-29258

cytochrome c siRNA (h): sc-29292

cPLA2 siRNA (h): sc-29280

ERK 1 siRNA (m): sc-29308

c-Src siRNA (h): sc-29228

p53 siRNA (h): sc-29435

Lamin A/C siRNA (h): sc-35776

Häufig gestellte Fragen (FAQs)

• Worin bestehen die Vor- und Nachteile bei der Verwendung von shRNA bzw. siRNA?

  Die Transfektion von siRNA Gen Silencern in Zellen liefert eine schnelle und effiziente, allerdings nur relativ kurz andauernde, Möglichkeit die Expression des Ziel-Gens herunter zu regulieren. Eine länger andauernde und sogar dauerhafte Unterdrückung der Genexpression kann durch die Verwendung von shRNA Plasmiden oder shRNA Lentiviralen Partikeln mit anschließender Selektion duch Zugabe von Puromycin erreicht werden. Deshalb ist besonders bei der Untersuchung von Proteinen mit einem geringen Umsatz, die Verwendung von shRNA Plasmiden oder shRNA Lentiviralen Partikeln gegenüber der Verwendung von siRNA vorzuziehen.

• Worin bestehen die Vor- und Nachteile bei der Verwendung von shRNA Lentiviralen Partikeln bzw. shRNA Plasmid DNA?

  Für die Verwendung von shRNA Plasmiden zur Inhibierung der Expression des Ziel-Gens muss eine Transfektion der Zellen erfolgen. Im Gegensatz hierzu werden unsere shRNA Lentiviralen Partikel transduktions-fertig geliefert. Die shRNA Lentiviralen Partikel können einfach ohne Zugabe weiterer Reagenzien zu den Zellen gegeben werden und nahezu jede Säugerzelllinie, wie z.B. Primärzellen oder sich nicht teilende Zellen transduzieren. shRNA Plasmide und shRNA Lentivirale Partikel können beide für stabile, d.h. dauerhafte Expression der shRNA verwendet werden werden wenn eine Selektion der Zellen durch Puromycin erfolgt. Lentivirale Partikel werden auf Trockeneis verschickt während der Versand von shRNA Plasmiden bei Umgebungstemperatur oder Blue Ice erfolgt .

• Müssen bei der Verwendung von SCBT shRNA Produkten besondere Aspekte der biologischen Sicherheit berücksichtigt werden?

  Lentivirale Partikel können in gewöhnlichen S2 Zellkulturräumen (Biosafety Level 2 / Schutzstufe 2) verwendet werden (und sollten mit der selben Sorgfalt und Vorsicht verwendet werden, wie auch andere potentiell infektiöse Reagenzien)

• Sind die verwendeten Sequenzen für die shRNA Plasmide identisch mit denen der entsprechenden siRNA gegen das gleiche Genprodukt? Sind die verwendeten Sequenzen für Kunden erhältlich?

  Ja. Die Sequenzen für die unsere shRNA Plasmide kodieren sind identisch mit denen, die in den entsprechenden siRNA Gen Silencern verwendet werden. Die Sequenzen teilen wir Kunden eines RNAi Produkts gerne auf Anfrage mit. Bitte nehmen Sie hierzu mit unserem technischen Kundendienst Kontakt auf.

• Die shRNA Plasmide bestehen aus einem Pool (=Gemisch) aus drei bis fünf lentiviralen Vektor-Plasmiden. Werden die verschiedenen Plasmide jeweils einzeln in separaten Röhrchen oder als ein Gemisch der Sequenzen in nur einem Röhrchen geliefert?

  Die shRNA Plasmide werden als Gemisch in einem einzigen Röhrchen geliefert. Bei unseren siRNA können die individuellen Sequenzen separat bestellt werden. Bitte nehmen Sie Kontakt mit dem Technischen Service auf.

• Welcher Typ lentiviraler Vektor wird in den SCBT Produkten verwendet? Wie lautet der "Name des Vektor"?

  Unser Lentiviraler Vektor ist ein für unsere Lentiviralen Produkte angefertigter, proprietärer Vektor. Bitte lassen Sie uns wissen, welche Details zu unserem Vektor Sie suchen und warum Sie diese benötigen. Unser technischer Kundendienst kann Ihnen vielleicht die gewünschte Auskunft geben oder Ihnen bei der Beantwortung Ihrer Fragestellung helfen, ohne dass dabei firmeninterne Information notwendig wäre.

• Welcher Promoter wird in den Vektoren verwendet?

  Unsere Vektoren verwenden einen H1 Promoter.

• Welcher Selektionsmarker wird in den Vektoren verwendet?

  Unsere Vektoren verwenden ein Gen für die Puromycin-Resistenz, welches für das Enzym Puromycin N-Acetyltransferase kodiert und für die Selektion von erfolgreich transfizierten (shRNA) oder transduzierten (lentivirale Partikel) Zellen genutzt wird.

• Wie kann ich die Lentiviralen Vektor Plasmide propagieren?

  Unsere shRNA Plasmid DNA und Lentiviralen Partikel werden als transfektions- bzw. transduktionsfertige Produkte angeboten, für die keine weitere Aufbereitung erforderlich ist. Unsere shRNA Gen Silencer sind Verbrauchsprodukte, für die kein Propagationsprotokoll angeboten wird.

• Was ist copGFP und wie wird es im Zusammenhang mit shRNA Plasmiden und Lentiviralen Partikeln verwendet?

  Durch Zugabe des copGFP Plasmids oder copGFP Lentiviraler Partikel zu einer separaten Probe der Zielzellen kann die Effizienz der Transfektion bzw. der viralen Transduktion für diese Zellen ermittelt werden. Das copGFP Plasmid oder die copGFP Lentiviralen Partikel führen zur Expression des ursprünglich aus dem Ruderfußkrebs (engl.: copepod) stammenden grünen Fluoreszenzproteins (GFP). Das grüne Fluoreszenzprotein (copGFP) kann mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie detektiert werden.

• Worin besteht der Unterschied zwischen (h) und (h2) shRNA Produkten (z.B.: E-Cadherin, sc-35242-SH und sc-44222-SH)?

  Die (h) und (h2) Produkte werden zur Regulation des gleichen humanen Gens angeboten. Die (h) und (h2) Produkte bestehen allerdings aus verschiedenen Sequenzen bzw. verschiedenen Sequenzpools.

• Welche Supportprodukte und Transfektions-Reagenzien bietet SCBT für die shRNA Plasmide an?

  Wie empfehlen die Verwendung unseres shRNA Plasmid DNA Transfektions-Reagenz, sc-108061 zusammen mit unserem shRNA Plasmid DNA Transfektions-Medium, sc-108062. Wie empfehlen die Verwendung unserer shRNA Kontroll-Plasmid DNAs, entweder sc-108060 (A), sc-108065 (B) oder sc-108066 (C). Diese kodieren für gescrambelte shRNA Sequenzen welche keine bisher bekannte Säuger-mRNA treffen sollten.

Literaturhinweise

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