USP14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403167-ACT

USP14は、26Sプロテアソームの19S調節粒子に結合する脱ユビキチン化酵素をコードしており、ユビキチン鎖を切り詰めることで、分解に先立つ基質の処理を調節します。ユビキチンのリサイクルとプロテアソームの処理能力を制御することにより、USP14は細胞内プロテオスタシス、ストレス応答、ならびにタンパク質の品質管理とターンオーバーのバランスに影響を与えます。この活性は、細胞周期の進行、DNA損傷応答、そしてユビキチン依存的な制御に感受性のあるシグナル伝達ネットワークを司る経路と交差します。USP14機能の変化は、神経生物学やがん関連の表現型に関わる、プロテオスタシスの破綻やユビキチン‐プロテアソーム系シグナル伝達の異常という文脈で研究されています。

USP14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。