Tom20 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400041

Panoramica

TOMM20 codifica Tom20, un recettore chiave della translocasi della membrana mitocondriale esterna (complesso TOM) che riconosce le sequenze di targeting mitocondriale N-terminali e avvia l’importazione nei mitocondri delle proteine codificate dal nucleo. Regolando la biogenesi delle proteine mitocondriali, Tom20 influenza la fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale, la mitofagia e le vie di segnalazione dello stress che modellano il metabolismo e la sopravvivenza cellulare. Alterazioni dell’espressione di TOMM20 o dell’efficienza di importazione mitocondriale sono state collegate alla disfunzione mitocondriale osservata nella neurodegenerazione, nei disturbi cardiometabolici e nel rimodellamento metabolico associato al cancro. Tom20 è quindi ampiamente utilizzato come nodo funzionale per studiare l’omeostasi mitocondriale, la proteostasi e la comunicazione tra organelli e nucleo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tom20 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOMM20 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOMM20 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOMM20 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tom20.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOMM20 per lo studio della segnalazione di Tom20, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TOMM20 critici per la funzione di Tom20
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOMM20 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tom20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tom20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOMM20. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tom20 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tom20 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOMM20 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOMM20 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.