SCCA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403601-ACT

SERPINB3は、セrピン（serpin）ファミリーに属する細胞内セリンプロテアーゼ阻害因子である扁平上皮癌抗原1（SCCA1）をコードしており、プロテアーゼによって駆動されるタンパク質恒常性（プロテオスタシス）や上皮のストレス応答を調節します。SCCA1はカテプシン様およびキマーゼ様プロテアーゼ活性を抑制し、分化した上皮におけるリソソームの恒常性、抗原処理、ならびにアポトーシス／炎症シグナル伝達プログラムに影響を与え得ます。SERPINB3の発現異常は、扁平上皮系腫瘍の文脈で観察される上皮リモデリングや免疫関連表現型と関連付けられており、腫瘍随伴炎症や細胞生存経路を研究する上で有用なマーカー／機能的ハブとなります。細胞モデルでは、SERPINB3の改変は、酸化ストレス、サイトカインシグナル、上皮分化を制御する経路と併せて評価されることが一般的です。

SCCA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SERPINB3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCCA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SERPINB3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSERPINB3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCCA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSERPINB3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCCA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSERPINB3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCCA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。