Rtn-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404072-LAC

RTN3 codifica la reticulon-3 (Rtn-3), una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che contribuisce a modellare l’architettura tubulare del RE e alla dinamica del traffico RE–Golgi. Rtn-3 è implicata nella proteostasi e nella risposta cellulare alle proteine mal ripiegate, collegandola alla segnalazione dello stress del RE e a vie correlate che influenzano l’omeostasi neuronale. Nel sistema nervoso, RTN3 è stata associata alla processamento della proteina precursore dell’amiloide e alla biologia dei neuriti, sostenendo la ricerca sui meccanismi alla base di fenotipi neurodegenerativi. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di RTN3 sono state inoltre messe in relazione con perturbazioni del traffico di membrana e della funzione sinaptica, rendendola un bersaglio utile per analizzare la regolazione della rete del RE in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale Rtn-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RTN3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Rtn-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RTN3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Rtn-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RTN3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.