Raf-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400202-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Raf-1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Raf-1ダブルニカースプラスミド（h）およびRaf-1ダブルニカースプラスミド（h2）は、RAF1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Raf-1 抗体 (E-10): sc-7267
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Raf-1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400202-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Raf-1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400202-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAF1はセリン／スレオニンキナーゼであるRaf-1をコードしており、活性化した受容体型チロシンキナーゼからの入力をMAPK/ERKカスケードへ伝達するRASシグナル伝達の中心的エフェクターです。Raf-1はMEK1/2などの下流キナーゼをリン酸化し、それに伴うERK1/2の活性化を介して、細胞周期の進行、分化、アポトーシス、ストレス応答を制御します。RAF1活性の制御破綻やMAPK経路シグナルの異常は、がん化（腫瘍性形質転換）や治療抵抗性機構に関与するとされ、RAF1の生殖細胞系列または体細胞の変化は、発達症候群や心筋症に関連するシグナル異常とも関連づけられています。増殖因子および炎症性シグナルを統合するシグナルハブとして、Raf-1はPI3K-AKTとの経路クロストーク、フィードバック制御、ならびにホスファターゼによるキナーゼ活性制御の観点から広く研究されています。
Raf-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAF1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAF1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAF1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAF1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。