PRDM1/Blimp-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400585-ACT

PRDM1, que codifica o repressor transcricional PRDM1/Blimp-1, é um regulador mestre de programas de diferenciação terminal no sistema imunitário, incluindo a formação de plasmócitos e as decisões de destino das células T efetoras. Integra a sinalização de citocinas e de recetores de antigénio para remodelar a cromatina e reprimir genes de linhagens alternativas, coordenando vias que controlam a proliferação, a apoptose e a adaptação metabólica. A atividade de PRDM1/Blimp-1 também contribui para a manutenção de estados imunitários residentes nos tecidos e para a regulação da expressão de genes inflamatórios. A expressão ou função desregulada de PRDM1 está implicada em disfunção imunitária e na biologia de doenças hematológicas, incluindo alterações na maturação de células B e nos circuitos transcricionais em contextos associados a linfoma.

PRDM1/Blimp-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRDM1/Blimp-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRDM1/Blimp-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRDM1/Blimp-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRDM1/Blimp-1 em células tumorais com expressão de PRDM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.