p73 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416822-ACT

Das humane Gen **TP73** kodiert **p73**, einen Transkriptionsfaktor der p53-Familie, der Zellschicksalsentscheidungen reguliert, darunter Zellzyklusarrest, Apoptose, Differenzierung und Seneszenz. Durch kontextabhängige Transaktivierung von Zielgenen integriert p73 Stressantworten und beeinflusst die DNA-Schadenssignalisierung, mitochondriale Apoptoseprogramme sowie Entwicklungsprozesse. Die Isoformvielfalt (TAp73 und ΔNp73) kann die transkriptionellen Outputs in Richtung proapoptotischer oder pro-survival Zustände verschieben und so die Epithelintegrität und neuronale Entwicklung prägen. Eine dysregulierte TP73-Aktivität und ein verändertes Isoformgleichgewicht werden häufig in der Krebsbiologie, bei neuroentwicklungsbezogenen Störungen und in Mechanismen der Chemoresistenz untersucht, da sie transkriptionelle Netzwerke und die genomische Stabilität modulieren.

p73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TP73-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

p73 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TP73-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TP73-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p73-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TP73-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p73-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p73-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TP73-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.