MZF-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403142-ACT

Myeloider Zinkfinger 1 (MZF1/MZF-1) ist ein C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor mit KRAB-Domäne und spielt eine wichtige Rolle bei der Festlegung hämatopoetischer Zelllinien und der myeloischen Differenzierung. Er reguliert Genexpressionsprogramme, die den Zellzyklus, die Apoptose und die Zellmigration beeinflussen, und ist in umfassendere transkriptionelle Netzwerke eingebunden, welche Proliferation und Stressantworten steuern. Eine dysregulierte MZF1-Aktivität wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und aberranter transkriptioneller Reprogrammierung in hämatologischen Erkrankungen sowie in mehreren Kontexten solider Tumoren in Verbindung gebracht. Als DNA-bindender Regulator wird MZF-1 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf onkogene Signalwege, das metastatische Potenzial und zelllinienspezifische transkriptionelle Schaltkreise untersucht.

MZF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MZF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MZF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MZF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MZF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MZF-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MZF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MZF-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MZF-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MZF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.