LOX Plasmide Double Nickase (m): sc-421456-NIC

Il gene **Lox** del topo codifica la lisil ossidasi (LOX), un’ammino-ossidasi secreta e rame-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa dei residui di lisina nel collagene e nell’elastina, favorendo la reticolazione covalente e la maturazione della matrice extracellulare (ECM). L’attività di LOX modella la rigidità e l’architettura dei tessuti, influenzando adesione e migrazione cellulare e le vie di meccanotrasduzione collegate alla segnalazione delle integrine e alla dinamica delle adesioni focali. Una rimodellazione dell’ECM dipendente da LOX non regolata correttamente è stata associata, in sistemi modello, a processi fibrotici, a una riparazione anomala delle ferite e a cambiamenti del microambiente rilevanti per la progressione tumorale. In quanto enzima che modifica la matrice, LOX è spesso studiata per i suoi effetti sulla biologia dello stroma, sull’integrità vascolare e sulle risposte di rimodellamento all’infiammazione o all’ipossia.

LOX Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lox nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lox. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lox. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lox interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.