Leukocyte-type 12-LO Plasmide Double Nickase (m): sc-419089-NIC

Mouse Alox15 codifica la 12-lipossigenasi di tipo leucocitario (12-LO), una diossigenasi del ferro non-eme che ossigena acidi grassi polinsaturi come l’acido arachidonico per generare mediatori lipidici bioattivi, tra cui il 12-HETE e altre ossilipine correlate. Questi prodotti partecipano a segnali sensibili allo stato redox, alla regolazione delle risposte infiammatorie, alla chemiotassi dei leucociti e al rimodellamento lipidico, collegando l’attività di Alox15 al metabolismo degli eicosanoidi e ai programmi di risoluzione. Nei contesti di cellule immunitarie e vascolari, i metaboliti derivati dalla 12-LO possono influenzare la segnalazione citochinica, lo stress ossidativo e le decisioni sul destino cellulare che modellano l’infiammazione tissutale. Di conseguenza, Alox15 è ampiamente studiato in modelli di infiammazione, aterosclerosi, disfunzione metabolica e danno tissutale immuno-mediato, in cui l’equilibrio dei mediatori lipidici è un determinante chiave del fenotipo.

Leukocyte-type 12-LO Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Alox15 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Alox15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Alox15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Alox15 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.