Partículas Lentivirales de Activación (h) IRE1α: sc-400576-LAC

ERN1 codifica la enzima 1 alfa que requiere inositol (IRE1α), una quinasa/endoribonucleasa transmembrana residente del RE que actúa como sensor principal de proteínas mal plegadas y como iniciador clave de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). Ante el estrés del RE, IRE1α se oligomeriza y se autofosforila, activando funciones de RNasa que incluyen el empalme no convencional del ARNm de XBP1 para producir el factor de transcripción XBP1s y la degradación regulada dependiente de IRE1 (RIDD) de transcritos selectos para remodelar la capacidad secretora. Estas actividades se integran con la proteostasis, el metabolismo lipídico, la autofagia y la señalización inflamatoria mediante la intercomunicación de la UPR con vías como NF-κB y JNK. La señalización desregulada de ERN1/IRE1α se asocia con la adaptación al estrés celular en el cáncer, en contextos de enfermedad metabólica, neurodegeneración y diferenciación de células inmunitarias, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la señalización del estrés del RE.

Las partículas de activación lentiviral IRE1α (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ERN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IRE1α (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ERN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IRE1α. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ERN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.