Plásmido CRISPR de Activación (h) IKK alpha: sc-400492-ACT

CHUK codifica IKK alfa (IKKα), una subunidad catalítica del complejo de la quinasa IκB que integra señales aguas arriba procedentes de las vías del receptor de TNF, los receptores tipo Toll y los receptores de antígeno para regular programas transcripcionales de NF-κB. IKKα es esencial para la vía no canónica de NF-κB mediante la fosforilación de NFKB2/p100 y sostiene la señalización p52–RelB, que influye en la organogénesis linfoide, la diferenciación de células inmunitarias y la expresión de genes inflamatorios. Más allá de NF-κB, IKKα participa en la comunicación cruzada con la señalización de MAPK y con vías relacionadas con interferón, y se ha vinculado a funciones asociadas a la cromatina que afectan el control transcripcional. La actividad desregulada de CHUK/IKKα se asocia con inflamación aberrante, disfunción inmunitaria y redes de señalización relevantes para el cáncer, lo que lo convierte en un blanco frecuente de estudios mecanísticos sobre la regulación de vías y la transcripción sensible al estrés.

IKK alpha El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHUK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IKK alpha El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHUK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHUK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IKK alpha. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHUK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IKK alpha en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IKK alpha en células tumorales con expresión de CHUK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.