The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
HSP70-1双切口酶质粒(h): sc-418088-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- HSP70-1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- HSP70-1双切酶质粒（h）和HSP70-1双切酶质粒（h2）编码针对HSPA1A的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：HSP70: sc-373867，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
HSP70-1双切口酶质粒(h) | sc-418088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP70-1双切口酶质粒(h2) | sc-418088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA1A 编码人热休克蛋白 HSP70-1，这是一种 ATP 依赖性的分子伴侣，通过辅助新生多肽折叠、防止蛋白聚集，并促进应激损伤蛋白的再折叠或降解来维持蛋白质稳态（proteostasis）。HSP70-1 在细胞热休克反应中与 HSF1 及 DNAJ/HSP40、BAG 家族等共伴侣蛋白协同作用，并影响泛素–蛋白酶体系统以及与自噬相关的质量控制。通过调节蛋白质稳态、抗原呈递和应激信号传导，HSP70-1 与多种以蛋白毒性应激为特征的病理状态密切相关，包括神经退行性变、肿瘤细胞在应激下的存活以及炎症状态。
HSP70-1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 HSPA1A 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对HSPA1A内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏HSPA1A的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了HSPA1A基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。