Plásmido CRISPR de Activación (h) HEXB: sc-404765-ACT

El gen humano **HEXB** codifica la subunidad beta de la **β-hexosaminidasa lisosomal**, que forma heterodímeros funcionales con **HEXA** o homodímeros para catalizar la degradación escalonada del gangliósido **GM2** y de otros glicoconjugados. Esta actividad enzimática respalda el recambio de macromoléculas dependiente del lisosoma y procesos más amplios relacionados con el tráfico endo-lisosomal, la comunicación entre autofagia y lisosoma, y el catabolismo de lípidos. La alteración de la función de **HEXB** perturba la homeostasis de esfingolípidos y el almacenamiento lisosomal, vinculando a este gen con variantes de la gangliosidosis GM2 y con fenotipos celulares neurodegenerativos impulsados por la acumulación de sustrato. Como componente de una hidrolasa lisosomal, **HEXB** se estudia con frecuencia en el contexto de la biología neuronal y glial, el metabolismo lipídico y las respuestas al estrés derivadas de una función lisosomal deteriorada.

HEXB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HEXB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HEXB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HEXB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HEXB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HEXB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HEXB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HEXB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HEXB en células tumorales con expresión de HEXB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.