Glucosidase I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405014

概要

MOGSは、小胞体（ER）ルーメンに局在する酵素であるグルコシダーゼIをコードしており、新生糖タンパク質上のGlc₃Man₉GlcNAc₂から末端のα1,2結合グルコースを切断することで、N結合型糖鎖プロセシングを開始します。この初期トリミング段階は、カルネキシン／カルレティキュリンによる品質管理サイクルへの導入を制御し、タンパク質のフォールディング、ER関連分解（ERAD）、および分泌経路での成熟に影響します。MOGSの機能が障害されるとプロテオスタシスが乱れ、細胞表面や分泌タンパク質における糖タンパク質組成が変化し、その結果として受容体の輸送や免疫認識にも下流の影響が及びます。グルコシダーゼIの遺伝子変異や機能喪失は、先天性糖鎖付加異常症（CDG）や、より広範なERストレス関連の表現型と関連づけられており、糖タンパク質依存的な細胞プロセスを研究する上で重要です。

Glucosidase I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMOGS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MOGS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MOGSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Glucosidase Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Glucosidase Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MOGS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Glucosidase Iの機能に不可欠なMOGSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MOGSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Glucosidase I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGlucosidase I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MOGS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Glucosidase I HDRプラスミド（h）および Glucosidase I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMOGSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMOGS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。