Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucose Transporter Glut2: sc-400347-ACT

SLC2A2 code pour le transporteur facilité du glucose GLUT2, un transporteur à faible affinité et à forte capacité, qui permet un flux bidirectionnel de glucose à travers la membrane plasmique. Chez l’humain, GLUT2 contribue à la détection du glucose et à l’homéostasie métabolique dans des tissus tels que le foie, les cellules β pancréatiques, le rein et l’intestin, en influençant la glycolyse, la néoglucogenèse et la dynamique de sécrétion d’insuline. Son activité s’intègre aux voies du métabolisme des glucides et de l’énergie en régulant la disponibilité intracellulaire du glucose et les réponses de signalisation en aval. Une expression ou une fonction altérée de SLC2A2 a été associée à des phénotypes de dérégulation métabolique, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la prise en charge du glucose et des programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments.

Glucose Transporter Glut2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC2A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC2A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC2A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC2A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC2A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.