FXR/NR1H4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417410-LAC

NR1H4 codifica il recettore X del farnesoide (FXR), un recettore nucleare attivato da ligandi che agisce da regolatore trascrizionale dell’omeostasi degli acidi biliari, del colesterolo e dei lipidi. FXR integra i segnali provenienti dagli acidi biliari per controllare reti geniche che governano la sintesi e il trasporto degli acidi biliari, inclusa la regolazione a feedback delle vie metaboliche epatiche e del circolo enteroepatico. Attraverso il crosstalk con programmi di segnalazione dei recettori nucleari e dell’infiammazione, FXR influenza la fisiologia di epatociti ed enterociti, la funzione di barriera e l’adattamento metabolico. La disregolazione dell’attività di NR1H4/FXR è stata associata a fenotipi epatici colestatici e metabolici ed è spesso studiata nel contesto della steatosi, della malattia epatica grassa non alcolica e della disfunzione dell’asse intestino–fegato.

Le particelle di attivazione lentivirale FXR/NR1H4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NR1H4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FXR/NR1H4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NR1H4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FXR/NR1H4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NR1H4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.