Plasmide CRISPR/Cas9 KO Flotillin-1 (m): sc-420381

Présentation

Flot1 code la flotilline-1, une protéine d’échafaudage conservée associée aux radeaux lipidiques, enrichie à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux, où elle contribue à organiser des microdomaines dédiés à la transduction du signal. La flotilline-1 participe à l’endocytose indépendante de la clathrine, au trafic membranaire et au remodelage du cytosquelette, influençant l’internalisation des récepteurs et des voies de signalisation en aval, notamment les réseaux MAPK/ERK et des kinases de la famille Src. Dans les cellules murines, la flotilline-1 a été associée à la régulation de l’adhérence et de la migration cellulaires, à la signalisation des récepteurs immunitaires et à la fonction neuronale, via ses rôles dans l’organisation membranaire et la dynamique vésiculaire. Une biologie de la flotilline dérégulée a été liée à des phénotypes de prolifération et de migration altérés et a été étudiée dans le contexte de la signalisation liée au cancer, de la neurodégénérescence et des processus inflammatoires, en tant que modulateur mécanistique plutôt qu’effecteur direct.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Flotillin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Flot1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Flot1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Flot1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Flotillin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Flot1 pour l'étude de la signalisation de Flotillin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Flot1 essentiels à la fonction de Flotillin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Flot1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Flotillin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Flotillin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Flot1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Flotillin-1 plasmide HDR (m) et le Flotillin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Flot1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Flot1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.