Daxx CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400686-ACT

Das humane DAXX kodiert das Death-Domain-assoziierte Protein Daxx, einen multifunktionalen nukleären Faktor, der an der Transkriptionskontrolle, dem Chromatin-Remodeling und stressresponsiver Signalübertragung beteiligt ist. Daxx interagiert mit ATRX und Histon H3.3, um die Organisation von Heterochromatin, die telomerische und perizentromerische Integrität sowie die Repression von Transposons zu regulieren, und ist damit mit epigenetischen Erhaltungswegen verknüpft. Außerdem lokalisiert es in PML-Nuklearkörperchen und moduliert Netzwerke der Apoptose sowie der DNA-Schadensantwort durch Interaktionen mit verschiedenen Transkriptionsfaktoren und Signalmediatoren. Eine Fehlregulation von DAXX wurde mit veränderter Genomstabilität und aberranten Genexpressionsprogrammen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Chromatin- und Stresswegen unterstützt.

Daxx Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DAXX-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Daxx Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DAXX-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DAXX-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Daxx-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DAXX-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Daxx-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Daxx-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DAXX-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.