CYP1A1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419897-ACT

Il gene murino **Cyp1a1** codifica l’enzima del citocromo P450 **CYP1A1**, una monoossigenasi eme-dipendente che catalizza il metabolismo ossidativo di xenobiotici e substrati endogeni. La sua trascrizione è fortemente indotta a valle della segnalazione del recettore degli idrocarburi arilici (**AHR**), collegando i ligandi ambientali alla biotrasformazione di fase I e alle successive vie di detossificazione. L’attività di CYP1A1 influenza l’equilibrio redox cellulare e può modulare la produzione di specie reattive dell’ossigeno durante il turnover del substrato, intersecando programmi di risposta allo stress e la segnalazione infiammatoria. Un’espressione o attività disregolata di CYP1A1 è stata associata a una diversa suscettibilità agli agenti chimici e a processi rilevanti per la carcinogenesi, supportandone l’impiego in tossicologia, biologia dell’esposizione e studi sulle interazioni gene–ambiente.

CYP1A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp1a1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP1A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp1a1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp1a1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP1A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp1a1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP1A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP1A1 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp1a1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.