Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
cyclin D1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400047
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cyclin D1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cyclin D1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cyclin D1 Anticuerpo (A-12): sc-8396
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cyclin D1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400047 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CCND1 codifica la ciclina D1, un regulador central de la transición del ciclo celular G1/S que activa CDK4/6 para fosforilar las proteínas de la familia RB y promover la transcripción dependiente de E2F. La ciclina D1 integra señales mitogénicas y de nutrientes aguas abajo de vías como RTK–RAS–MAPK y PI3K–AKT, coordinando la proliferación con el control del crecimiento y la integridad de los puntos de control. La expresión desregulada de CCND1 o el aumento de su número de copias se asocian con frecuencia con una entrada aberrante en el ciclo celular y con inestabilidad genómica, lo que la convierte en una característica molecular comúnmente estudiada en la tumorigenia y en las redes de señalización oncogénica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cyclin D1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCND1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCND1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCND1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cyclin D1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCND1 para la investigación de la señalización de cyclin D1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CCND1 críticos para la función de cyclin D1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCND1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cyclin D1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cyclin D1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCND1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cyclin D1 (h) y el plásmido HDR cyclin D1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCND1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCND1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.