Plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-6 (h): sc-403405

Présentation

CLDN6 code la claudine‑6, une protéine des jonctions serrées à quatre passages transmembranaires, qui contribue à la formation de la barrière épithéliale et au contrôle de la perméabilité paracellulaire via l’assemblage de brins fondés sur les claudines. En régulant l’adhésion cellule‑cellule, la polarité et la signalisation jonctionnelle, la claudine‑6 peut influencer des processus liés à la différenciation épithéliale, à la migration et à l’organisation des tissus. Une expression altérée de CLDN6 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux, où elle est souvent étudiée en lien avec le remodelage des jonctions, les changements d’état épithélial et les voies associées à l’invasion. Comme CLDN6 est régulé au cours du développement et fréquemment peu exprimé dans les tissus adultes, il est également utilisé comme marqueur pour explorer les programmes de lignée et les phénotypes jonctionnels dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLDN6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLDN6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLDN6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine claudin-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLDN6 pour l'étude de la signalisation de claudin-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLDN6 essentiels à la fonction de claudin-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLDN6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le claudin-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le claudin-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLDN6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le claudin-6 plasmide HDR (h) et le claudin-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLDN6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLDN6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.