CCK-BR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401867-ACT

ヒトCCKBRは、コレシストキニンB受容体（CCK-BR）をコードする。CCK-BRはクラスAのGPCRで、ガストリンおよびコレシストキニン（CCK）ペプチドによって活性化され、主にGq/11に共役してホスホリパーゼCを刺激し、IP3/DAGシグナル伝達、細胞内Ca2+フラックス、ならびにPKC依存的な転写プログラムを誘導する。下流の作用としては、MAPK/ERKシグナル、細胞骨格ダイナミクス、消化管および神経系の文脈における分泌応答や増殖応答の調節が含まれる。CCKBRの活性は、神経内分泌性のシグナルを上皮の恒常性や興奮性と統合しており、受容体シグナルや発現の異常は、異常な増殖シグナルや炎症に伴うリモデリングとの関連で研究されている。さらに、リガンド–受容体の薬理学的特性が明確な膜受容体として、CCK-BRはGPCRの脱感作、トラフィッキング、ならびにセカンドメッセンジャー経路のバイアス（シグナル偏り）を解析する目的にも用いられている。

CCK-BR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCKBRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCK-BR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCKBR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCKBR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCK-BRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCKBR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCK-BR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCKBR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCK-BR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。